Методы количественного определения гормонов (часть 2)

Для некоторых гормонов использовались химические методы анализа. Вероятно, самым полезным среди них оказался метод определения йода, связанного с белком. Содержание такого иода в крови пропорционально количеству присутствующего тиреоидного гормона, и этот метод до сих пор применяется в клинике. Однако в целом химические методы определения гормонов в настоящее время используются редко.
Как это часто бывает в биологической науке, для ускорения дальнейшего прогресса нужна была разработка новых методов. Таким шагом вперед явилось создание «методов насыщения» — конкурентного связывания с белком и радиоиммунного анализа. В основе этих методов лежат сходные принципы.
Исследуемый гормон смешивают с очень небольшим количеством радиоактивного (меченого) гормона и дают установиться равновесию. Затем добавляют связывающий агент, который одинаково реагирует как с меченым, так и с немеченым гормоном. Связанный гормон отделяют от свободного и в обеих фракциях измеряют величину радиоактивности. Меченая и немеченая фракции находятся в состоянии равновесия, поэтому чем больше будет содержание немеченого, т. е. эндогенного, гормона, тем меньше будет связываться радиоактивного гормона и тем меньше будет радиоактивность в связанной фракции гормона. Параллельно с исследуемыми образцами используют также серию концентраций стандартного препарата данного гормона; таким образом строят стандартную кривую, с помощью которой находят количество гормона, содержащегося в данном образце. Общий принцип метода схематически представлен на рис. 1.1.

В методах конкурентного связывания с белком используют крупные белковые молекулы, и это связывание недостаточно специфично. В связи с этим образец, содержащий неизвестное количество гормона, должен быть достаточно чистым, и с этой целью часто приходится проводить довольно сложную процедуру очистки. Между тем в радиоиммунном анализе используются иммуноглобулины (антитела), которые специфическим образом связывают исследуемый гормон. Метод получения антител довольно сложен, и мы не будем его рассматривать. Однако связывание гормона антителами высокоспецифично, и это позволяет разделять и анализировать чрезвычайно малые количества гормонов. Правда, и в этом случае часто нужна бывает некоторая предварительная очистка образца, так как пока еще не удается получить абсолютно чистых и специфичных антител.
Нужно учитывать то, что с помощью радиоиммунных методов можно измерять только иммунологическую активность гормона, которая далеко не всегда совпадает с его биологической активностью. В связи с этим позже был разработан рецепторный метод анализа, в котором для связывания гормона используются специфические рецепторы, и это дает возможность получать более физиологическую меру концентрации гормона. Однако исключительно высокая точность и чувствительность радиоиммунных методов при правильном их использовании позволяет обрабатывать за один рабочий день многие сотни образцов, в которых концентрация гормона может составлять всего лишь 1 пг/мл. Это открывает широкие возможности для получения гормонов.

• Методы количественного определения гормонов (часть 1)
• Удаление, реимплантация и экстракты гормонов
• Что такое гормон?
• Контроль внешней среды и продуктов животноводства (часть 4)
• Контроль внешней среды и продуктов животноводства (часть 3)
• Контроль внешней среды и продуктов животноводства (часть 2)
• Контроль внешней среды и продуктов животноводства (часть 1)
• Особенности заживления ран у облученных животных (часть 4)
• Особенности заживления ран у облученных животных (часть 3)
• Особенности заживления ран у облученных животных (часть 2)