» » Подсчет лейкоцитарной формулы и других цитограмм

Подсчет лейкоцитарной формулы и других цитограмм

08.04.2015

Техника светового микроскопирования. Подсчет цитограмм крови и кроветворных органов производят при помощи светового микроскопа на окрашенных препаратах под иммерсионным объективом х90 и окуляром х7. Для лучшей дифференциации структуры клеточных элементов пользуются окуляром х10 или х20. Для достоверной дифференциации клеточных элементов и правильного подсчета гемограмм необходимо владеть техникой микроскопирования. При этом следует обратить внимание на рабочее состояние микроскопа, чистоту окуляров и объективов, исправность микровинта и др. Лучите пользоваться бинокулярным микроскопом. При микроскопировании оба глаза должны быть открыта, правая рука постоянно вращает микрометрический винт для получения четкости изображения, а левая используется для фиксации клеток па 11-клавишном счетчике. Для большей освещенности поля зрения необходимо поднять конденсор до предела, широко раскрыть диафрагму и пользоваться искусственным освещением (осветитель марки ОИ-31 или ОИ-7), которое близко к дневному и гарантирует постоянство силы тока. При сильном освещении полей зрения следует уменьшить силу тока (при работе с осветителем марки ОИ-7), опустить несколько тубус, уменьшить диафрагму или пользоваться светофильтрами (матовым, светло-голубым и др.), приложенными к микроскопу. Передвигать мазок необходимо при помощи крестообразного подвижного столика.
Для изучения общего фона мазка, т. е. определения степени насыщенности мазка клеточными элементами, возможности наличия крупных, малодифференцированных или атипичных, видоизмененных клеток, препарат просматривают под малым увеличением (окуляр х7, объектив х40 или х20). Такие клетки чаще и больше располагаются в конце мазка и по периферии. Для подсчета гемограмм па мазок наносят каплю иммерсионного масла, помещают на предметный столик и под контролем глаз опускают микровинтом тубус микроскопа до появления изображения.
При просмотре препаратов крови и кроветворных органов определяют количество и качество клеточных элементов. При установлении количества, т. с. выведения цитограмм крови и кроветворных органов, подсчет клеток проводят на всех участках мазка, так как различные виды лейкоцитов располагаются в определенных местах препарата. При определении качества, т. е. изучения топкой структуры клеточных элементов, выявления единичных молодых, малодифференцированных или атипичных клеток, просматривают мазок ориентировочно в последней его трети. Это более тонкое место мазка, где лейкоцита лежат свободно, хорошо окрашены и не сморщены, что наблюдается в начале мазка.
При дифференциации отдельных форм лейкоцитов в мазке необходимо на первых порах иметь, перед глазами для сравнения атлас клеток крови. Однако ограничиваться простым сличением обнаруженних форм с соответствующими рисунками нельзя. Нужно для каждой клетки выяснить, каково строение цитоплазмы и ядра именно при данных условиях окраски в мазке. Так, в плохо окрашенном мазке эозинофил может оказаться значительно бледнее, чем на рисунке, и иметь несколько другой оттенок, и все же при сравнении его с нейтрофилом станет ясной разница между ними. Различие между палочкоядерным и сегментоядерным нейтрофилами, четкое на схеме, может оказаться смазанным благодаря тому, что отдельные сегменты ядра в процессе обработки мазка сблизились или налегли один на другой.
Тщательное рассмотрение такой клетки при пользовании микрометрическим винтом поможет по расположению хроматина в ядре определить характер данной клетки. В тех случаях, когда решить с уверенностью вопрос об этом не удается, нужно помнить правило: сомнительную клетку лучше отнести к тем, которые чаще встречаются, ошибка будет наименьшей.
Значительные затруднения у начинающих встречаются при дифференциации лимфоцитов и моноцитов, тем более, что среди лимфоцитов попадаются большие клетки с сероватой цитоплазмой, моноцит же, наоборот, может оказаться съеженным и потому казаться маленьким. Здесь необходимо помнить о ядре, которое у лимфоцита всегда правильной формы, хроматин его имеет более грубую структуру и интенсивно окрашивается, тогда как ядро моноцита обычно неправильное, причудливой формы, представляется нежным, сетчатым.
Лейкоцитарная формула — процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов в мазках крови. Отдельные виды лейкоцитов, имея разные размер и удельный вес, в момент приготовления мазка, особенно если его делают медленно, распределяются неравномерно. По краю мазка располагаются более крупные клетки — нейтрофилы, моноциты, а по середине — более мелкие — лимфоциты. Поэтому при передвижении препарата произвольно или в направлении, соответствующем длине предметного стекла, лейкоцитарная формула будет подсчитана неправильно. Исходя из этого, было предложено несколько способов подсчета лейкоцитов в мазке.
Способ Шиллинга. По четырехпольному методу меандра мазок помещают па крестообразный столик и под иммерсионной системой микроскопа находят свободный край препарата. Сосчитав число клеток в первом поле зрения, продвигают мазок вглубь еще на одно поле. Так подсчитывают число клеток в четырех полях зрения, затем передвигают мазок вправо или влево еще па четыре поля зрения и таким же темпом возвращаются обратно к линии свободного края препарата. При передвижении мазка от края вглубь, в сторону и опять к кутаю получается ломаная линия, обозначающая собой букву П (линия меандра). В таком порядке подсчитывают четыре участка (по два с каждого края мазка, по 50 клеток в каждом, всего 200 лейкоцитов). При необходимости можно подсчитывать в каждом участке по 25 клеток, чтобы общее число лейкоцитов составляло 100.
Способ Филипченко. Мазок условно делят на три части: начальную, среднюю и конечную. От нижнего края предметного стекла до верхнего подсчитывают все лейкоциты, находящиеся в полях зрения. Всего подсчитывают 100 или 200 клеток и выводят лейкоцитарную формулу. При этих методах подсчета клеток в разных частях мазка достигается сравнительно достоверное определение лейкоцитарной формулы, учитывая неравномерность распределения лейкоцитов по стеклу.
Для подсчета лейкоцитов в мазках пользуются 11-клавишным счетчиком, на клавишах которого обозначены буквы М, С, Э, Лф, Мон и другие, соответствующие названиям отдельных лейкоцитов (миелоцита, сегментоядерные нейтрофилы, эозинфилы, лимфоциты, моноцита и др.). Над клавишами имеются окошечки, в которых при нажиме соответствующих им клавиш появляются цифры 1,2, 3 и т. д. В крайних правых окошечках подсчитывается общая сумма нажатых при подсчете клавиш. Когда сумма всех подсчитанных лейкоцитов составит 100 или 200, раздается звонок, указывающий па окончание подсчета. В окошечках счетчика каждая подсчитанная цифра указывает па процент тех или иных клеток в лейкоцитарной формуле, т. с. относительное их количество. При подсчете 200 клеток сумму отдельных форм делят пополам и получают содержание лейкоцитов в процензах.
Подсчет лейкоцитарной формулы производится так: при подсчете до 100 клеток количество подсчитанных лейкоцитов того или иного вида будет соответствовать стольким же процентам. Например, если эозинофилов 5 шт, то 5-100/100=5%. При подсчете 200 клеток надо полученное количество разделить на 2. Например, если сосчитано 145 лимфоцитов, то 145-100/200=72,5%. Эти цифры отражают относительное коли чесано того или иного вида лейкоцитов в крови.
Лейкоцитарный профиль в отличие от лейкоцитарной формулы отражает соотношение различных видов лейкоцитов в абсолютных цифрах и более точно определяет изменения в белой крови. Для выведения лейкоцитарного профиля необходимо подсчитать количество лейкоцитов в 1 мкл крови и определить лейкоцитарную формулу. Затем для подсчета абсолютного количества того или иного вида клеток в 1 мкл крови следует процент его в лейкоформуле умножить на количество лейкоцитов. Например, если количество лейкоцитов в 1 мкл крови 10 000, а процент лимфоцитов в лейкоформуле 75, то абсолютное количество лимфоцитов в 1 мкл крови будет 10 000-75:100=7500. Так же можно подсчитай, абсолютное количество любого вида лейкоцитов.
Изменение процентного соотношения лейкоцитов в лейкоцитарной формуле может быть, истолковано неправильно. Так, при нормальном количестве лейкоцитов, например 8 тыс/мкл, и лимфоцитов (60%) абсолютное число последних будет 4,800 в 1 мкл крови. При повышении числа лимфоцитов в лейкоформуле, предположим, до 75% и общем количестве лейкоцитов 6 тыс/мкл абсолютное число лимфоцитов будет 4,500 в 1 мкл крови, т. е. в пределах нормы. Значит, увеличение лимфоцитов в лейкоформуле не отражает увеличения их абсолютного количества, а, видимо, связано со снижением числа другого вида лейкоцитов.
Цитограммы — процентное соотношение ядерных элементов в пунктатах костного мозга (миелограмма), лимфатических узлов (аденограмма), селезенки (спленограмма) и печени (гепатограмма) выводят путем подсчета не менее 500—1000 клеток в конечной трети окрашенного мазка, где клетки располагаются равномерно, не налегая друг на друга. Для определения функционального состояния костного мозга ценным тестом является лейкоэритробластический индекс, полученный от деления суммы всех лейкоцитарных элементов на сумму эритроидных [Лейко (Л)/Эритро (Э)].


Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Информационный некоммерческий ресурс handcent.ru © 2022
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика