Пункция кроветворных органов (техника и инструментарий)

Получение пунктита костного мозга. Костномозговое кроветворение у человека до конца XIX в. изучали в основном па мазках костного мозга больных, умерших от различных заболеваний крови и кроветворных органов. Впервые прижизненное изучение костного мозга произвел русский ученый М. Афанасьев, резекцировавший для этой цели кусочки ребра у собаки. Он впервые применил подсчет ядерных элементов в единице объема (1 мкл) костного мозга для суждения о состоянии его функции.
Исходя из того, что у взрослого человека активный костный мозг содержится в губчатом веществе плоских костей, проф. А. Зейфарт применил метод получения костномозгового вещества путем трепанации грудной кости и ребер кюветкой. Такой метод позволял получать костный мозг без примеси крови. Ho сложность методики, связанная со значительным травмированием больных и последующим кровотечением из губчатой части кости, затруднила использование его в клинической практике. Нужен был простой и безопасный метод получения костного мозга. Этим требованиям отвечал предложенный академиком М.И. Арникиным в 1927 г. оригинальный метод прижизненной пункции грудной кости иглой Бира. Пункция, по мнению автора, технически проста и наиболее удобна, полученный пунктат является показателем изменении не только костного мозга грудины, но и активного костного мозга позвонков и ребер, бедра, большеберцовой кости. Недостаток этого метода — наличие в костномозговом пунктате примеси периферической крови, опасность прохождения иглой через заднюю компактную пласт пику грудины, неудачи пункции при склерозе, аплазии и т. д. В связи с чтим И.А. Кассирский внес техническое усовершенствование мглы, в которой предохранительный щиток ограничивает введение иглы в костномозговую полость дальше выбираемого расстояния. При этом исключается опасность осложнений. Игла выпускается медицинской промышленностью, се успешно применяют в клинической практике, и она может быть использована для пункции грудной кости мелких животных. В ветеринарии прижизненное изучение костного мозга начато значительно позже. Каждый исследователь, изучающий костномозговой пунктат у определенного вида животных (лошадей, овец, крупного рогатого скота), разрабатывал свою методику (с рассечением кожи и трепанацией кости у лошадей, пробным троакаром у овец, модифицированными иглами Бира или Боброва у лошадей, при помочит дрели и др.).
Инструментарий для пункции костного мозга. Несовершенство инструментария для получения пунктата костного мозга, рекомендация зачастую повала животного или местной анестезии, а также неопределенность места пункции ограничили использование существующих методов в практике. В 1962 г. Г.А. Симоняном и Г.С. Петровским был сконструирован более удобный и безопасный инструментарий и разработана доступная в производственных условиях методика прижизненной костномозговой пункции у крупного рогатого скота. Предложенный инструмент изготовлен из нержавеющей стали, которая хромирована или покрыта никелем, состоит из рукоятки и ввинчивающегося мандрена с собственной иглой (стальная трубка диаметром 2 мм). Ввиду разной толщины жировой прослойки грудной кости к инструменту прилагаются мандрены с собственно иглой трех размеров. Эта позволяет использовать инструмент для получения пунктата костного мозга у разных видов животных. Особенность данного инструмента заключается в том, что конец собственно иглы достигают канюли вставленного шприца, куда непосредственно попадает пунктат. Поэтому одним инструментом можно получить пунктат у нескольких животных, меняя после каждой пункции только стерильные собственно иглы. Данный инструмент выпускается зооветеринарной промышленностью и находит свое применение для пункции как костного мозга у разных видов животных, так и селезенки, лимфатических узлов и печени.
Техника костномозговой пункции — костный мозг у крупного рогатого скота берут из первых 2—3 сегментов грудной кости. Костная пластинка в этих сегментах тоньше, мягче, чем в других, и легко прокашивается иглой. От первых сегментов к последним плотность пластинки возрастает. Толщина жировой прослойки, покрывающей грудную кость, увеличивается в образном направлении, достигая наибольшей величины в области 1—2-го сегментов.
C возрастом животных красный костный мозг в первых сегментах замещается жировым. Поэтому у старых коров для получения качественного пунктата необходимо пунктировать последние сегменты. Плотность костной пластинки при этом преодолевается вращательным движением иглы.
Иглу и шприц стерилизуют при кипячении, затем просушивают в термостате или спирт-эфиром путем продувания, так как вода может вызвать гемолиз пунктата.
Пункцию грудной кости у крупных животных берут без анестезии в стоячем положении с фиксированной головой, при необходимости накладывая лошадям закрутку па губу, а коровам щипцы на носовую перегородку. Мелких животных (собак, свиней, овец) фиксируют в спинном или боковом положении. Шерсть на месте прокола выстригают и место обрабатывают спиртом пли настойкой йода. Иглу вводят снизу вверх во второй или последующие сегменты грудной кости, отступая от середины сегмента направо или палево на 1 см.
Иглу берут в правую руку, левой рукой оттягивают и прокалывают кожу. Затем под контролем пальцев этой же руки (сообщающих игле нужное направление и предохраняющих се от сгибания) прокалывают мягкие ткани и нижнюю пластинку грудной кости. Животные при этом испытывают мгновенную боль и беспокоятся во время прокола кожи, костной пластинки в момент высасывания пунктата. Момент прокола пластинки сегмента и проникновения копчика иглы в губчатую часть определяют по характерному ощущению хруста. После прокола надкостницы иглу продвигают вглубь па 0,5 см, вынимают мандрен, плотно вставляют в нижнее отверстие корпуса иглы канюлю шприца, притирая ее для создания вакуума, и энергичной аспирацией получают пунктат.
Причины неполучения костномозгового пунктата следующие: закупорка просвета иглы кусочками кости пли ткани; попадание иглы в пространство между сегментами (не ощущается характерного хруста, чувствуется, что игла проникает в хрящ, а не в кость); аплазия костного мозга в целом или отдельных участков пунктируемого сегмента. В таких случаях нужно прочистить просвет иглы мандреном и отодвинуть иглу немного вглубь или вниз. Если пунктат все же не пойдет, то лучше вынуть иглу и пунктировать следующий сегмент.
При невозможности получения пунктата из грудной кости его берут из бугра истинного ребра по линии сочленения с хрящевым ребром (у коров и быков с большой жировой прослойкой грудины), бедренной, плечевой или большеберцовой кости (у поросят), из проксимальной трети плюсневой кости (у кур).
Пунктата берут не более 0,1—0,2 мл, чтобы избежать примеси большого количества крови. Для этого удобно применять полиэтиленовые шприцы на 10—20 г. После выявления первых капель пунктата в канюле шприца аспирацию прекращают, быстро отнимают шприц, а затем иглу. Место прокола обрабатывают настойкой йода.
Насыщенность костномозгового пунктата ядерными элементами не всегда определяется количеством полученного пунктата. Это зависит от того места, куда попала игла, что объясняется неравномерным распределением кровеносных сосудов костного мозга, жировой ткани и собственной кроветворной паренхимы сегмента грудины.
Степень разведения пунктата кровью зависит также от скорости аспирации, травматизации и кровенаполнения сосудов в месте пункции, диаметра иглы и других причин. Чем меньше дна метр иглы, тем меньше примеси крови. При быстрой аспирации шприцем кровеносные капилляры разрываются после того, как костномозговое вещество почти без примеси крови попадает в шприц.
Полученный пунктат наносят па парафинированное часовое стекло и быстро готовят мазки па предметных стеклах для подсчета миелограммы, заполняют гемометр для определения содержания гемоглобина и смесители или пробирки Флоринского для подсчета количества ядерных элементов и эритроцитов.
Парафинированное стекло, как и 3,8%-ный раствор лимоннокислого натрия, употребляемый для орошений иглы и шприца, применяют для того, чтобы предотвратить быстрое свертывание пунктата. Время свертывания пунктата различно. Пунктат одних животных свертывается сразу же, а других — в течение 1—2 мин. Кроме того, играет роль количество крови. Чем меньше примеси крови, тем быстрее свертываемость пунктата.
Во время приготовления мазков следует шлифованное стекло проводить по предметному стеклу медленно, чтобы не травмировать молодые легкоранимые клетки.
В холодных и сырых помещениях мазки нужно готовить на предметных стеклах, подогретых до 20—25 °С, чтобы избежать деформирующего влияния па форменные элементы пунктата температурного фактора. Подозревают стекла па грелке пли крышке стерилизатора с горячей водой.
Пункция лимфатических узлов и селезенки. Для получения пунктата из поверхностных лимфатических узлов и селезенки применяют иглы Симоняна — Петровского или Боброва, с хорошо подогнанными мандренами. Иглу и 10-граммовый шприц с притертым поршнем стерилизуют путем кипячения с последующим тщательным обезвоживанием. Пользование сухими шприцем и иглой исключает отрицательное воздействие влаги па тканевые клетки полученного пунктата.
Прокол производят острой иглой с мандреном, затем извлекают мандрен, соединяют иглу со шприцем и аспирируют пунктат. Нельзя допускать прокол одной и той же иглой двух различных органов. Нарушаются правила асептики, оставшиеся на стенках просвета иглы клетки первого органа могут быть примешаны к клеточному содержимому второго пунктируемого органа. Место прокола кожи выстригают и обрабатывают 5%-ным раствором настойки йода.
При пункции подкожного лимфатического узла его фиксируют левой рукой, правой прокалывают оттянутую кожу и вводят иглу в ткань лимфоузла. Если игла проникла в лимфоузел, то при движении иглой ощущается смещение узла. В противном случае лимфоузел остается неподвижным. Круговыми движениями кончика иглы как бы разминают паренхиму лимфоузла, обрывают кусочки ткани, что обеспечивает аспирацию необходимого количества пунктата. Для исследования достаточно в просвет иглы насасывать незначительное количество пунктата, разъединить его со шприцем, а затем извлечь иглу из лимфоузла. В противном случае содержимое иглы разбрызгивается по стейке шприца, делая невозможным перенесение пунктата на предметное стекло.
Полученный пунктат имеет желтоватый или кровянистый цвет. Клетки органа или новообразования, разбавленные кровью, хорошо сохраняют свою тонкую структуру и доступны цитологическому изучению.
Пункция сильно увеличенной селезенки не безопасна. Беспокойное поведение животного, смещение селезенки при пункции, использование толстой иглы могут привесит к разрыву капсулы органа или крупного сосуда с последующим кровотечением и легальным исходом. Однако при соблюдении определенных правил взятие пунктата селезенки осложнений не вызывает.
Пункцию селезенки производят с левой стороны животного в области последнего межреберья или непосредственно за последним ребром, отступив на 5—8 см вниз от поперечных отростков позвонков. После прокола кожи иглу вводят на 2—4 см по направлению к правому локтю и шприцем быстро аспирируют пульпу селезенки.
После извлечения иглы ее вновь насаживают па шприц и обратным движением поршня наносят содержимое на предметное стекло. Чем меньше примеси крови, тем ценнее пунктат. При наличии примеси крови, чтобы избежать ее свертывания, быстро готовят мазки обычным методом приготовления препаратов крови. Если полученная масса густая, то ее осторожно размазывают топким слоем по предметному стеклу, предохраняя молодые клетки от раздавливания и деформации. Можно готовить препараты и по принципу отпечатков, прикладывая пинцетом или ватным тампоном комочки ткани на предметное стекло. Аккуратное приготовление препаратов способствует сохранению целостности клеточных элементов. При значительной примеси крови содержимое шприца наносят па парафинированное часовое стекло, сверху жидкую часть отсасывают, а из осевших на дне маленьких белесоватых крупинок готовят мазки.
Приготовленные мазки высушивают па воздухе, фиксируют и окрашивают по Паппенгейму. Микроскопическое исследование препаратов проводят с помощью иммерсионном системы. Для определения процентного соотношения клеточных элементов в мазках селезенки (спленограмма) и лимфатических узлах (аденограмма) подсчитывают по 200—500 клеток в зависимости от качества препарата и разновидности клеточных элементов.

• Получение проб крови и отдельных их компонентов
• Клиническая иммуногематология
• Система свертывания крови и противосвертывающие механизмы
• Ядерные сдвиги лейкоцитов
• Лейкоцитозы и лейкопении
• Эритроцитоз и анемии
• Регенерация и дегенерация
• Клетки ретикулярной стромы костного мозга
• Лимфобластический росток
• Мегакариобластический росток