» » Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

31.03.2015

Методические указания. Химические анализы на определение тех или иных веществ в крови, молоке, сыворотке крови требуют лабораторных навыков по качественному и количественному анализу. Выполнение заданий студенты производят подгруппами по 2-4 чел. Ниже приведены наиболее простые и доступные методы их выполнения.
Место работы: кабинет-лаборатория кафедры.
Подопытные животные: корова.
Приборы и материалы:
- для выполнения первого задания: микробюретки, химические стаканчики, пипетки до одного миллилитра, сантинормальный раствор соляной кислоты, децинормальный раствор едкого натрия;
- для второго - пробирки, градуированная пипетка, фарфоровая чашка, спиртовка, спирт 96°, петролейный эфир, чистый бензин, дистиллированная вода;
- для третьего - ступка, фильтровальная бумага, реактивы нитропруссид натрия, безводный углекислый натрий, сульфат аммония.
Задания:
1. Определить щелочной резерв крови.
2. Определить количество каротина в сыворотке крови.
3. Исследовать молоко и мочу на наличие кетоновых тел.
Порядок выполнения заданий.
Определение щелочного резерва крови производится по следующей методике: к 10 мл сантинормального раствора соляной кислоты прибавляют 0,2 мл крови. Смесь взбалтывают и титруют из микробюретки децинормальным раствором едкого натрия до появления мути и выпадения хлопьев.
Вычтя из единицы количество израсходованной щелочи, опустив нуль и помножив разность на 20, получим показатель щелочности в миллиграмм-процентах (мг%) в 100 мл крови.
Пример. Израсходовано 0,69 мл щелочи. Вычисляем щелочность крови: 1 - 0,69 = 0,31. Исключаем нуль и 31 - 20 = 620 (мг%).
Коэффициент 20 получается из следующего расчета: 0,01 мл децинормального раствора едкого натрия содержит 0,04 мг NaOH; 0,2 мл крови составляет Vsoo часть от 100 мл крови; увеличиваем 0,04 в 500 раз и получаем число 20.
В норме щелочной резерв колеблется в пределах (в мг%): у крупного рогатого скота 460-540, у овец 460-520, у лошадей (рабочих) 540-580.
Определение каротина в сыворотке крови. В сухую пробирку наливают 0,2 мл свежей сыворотки, крови.
Прибавляют 4 мл 96° спирта и тщательно взбалтывают.
Приливают 2 мл петролейного эфира (или чистого бензина с температурой кипения 16°). Содержимое хорошо перемешивают и оставляют на несколько минут в покое.
Затем по каплям приливают из пипетки дистиллированную воду - 1,5-2 мл. При этом в пробирке происходит разделение эфирного и спиртового слоя. Каротин экстрагируется эфиром и окрашивает верхний слой в слегка желтовато-зеленый цвет.
Из верхнего эфирного слоя берут градуированной пипеткой 1 мл жидкости и по каплям испаряют ее на дне фарфоровой чашечки (предварительно слегка нагретой). Каплю необходимо опускать каждый раз на одно и то же место.
С появлением на дне чашечки едва заметного желтого кольца испарение прекращают и отмечают количество использованной жидкости. Появление кольца указывает на то, что в испарившемся количестве экстракта содержится 0,04 микрограмма, или 0,00004 мг каротина. Отсюда содержание каротина в 100 мл сыворотки в мг% вычисляют по формуле

Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

где X - содержание каротина в 100 мл сыворотки (мг%);
0,04 - содержание каротина в испарившемся количестве сыворотки в гаммах (микрограммах);
2 - количество миллиметров петролейного эфира;
К - количество миллилитров испарившегося эфирного экстракта до получения желтого кольца на дне чашечки;
0,2 - количество испытуемой сыворотки;
100 - приведение содержания каротина в 100 мл сыворотки; 1000 - перевод граммов в миллиграммы.
Для вычисления содержания каротина пользуются специальной шкалой П. Т. Лебедева.
Определение кетоновых тел в сыворотке крови, в моче и в молоке. Кетоновые тела (бета-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты, ацетон) образуются главным образом в печени и в меньшей степени в почках, а у жвачных в стенке преджелудков и молочной железе в результате окисления жирных кислот, а также в процессе обмена углеводов и некоторых аминокислот. При нормальном обмене веществ в организме ацетоуксусная кислота распадается на углекислый газ и воду (при включении в цикл три-карбоновых кислот), бета-оксимасляная кислота окисляясь превращается в высшие жирные кислоты, которые идут на синтез нейтральных жиров и других липидов.
Для выявления кетоновых тел проводят качественную реакцию, используя реактив Лестраде.
Обеспечение: испытуемая сыворотка, моча и молоко от животных, реактив Лестраде (натрия нитропруссида 1 г + натрия углекислого безводного 20 г + аммония сульфата 20 г).
Реактивы смешивают и растирают в ступке до получения мелкого однородного порошка, который затем хранят в тёмной посуде с плотно притёртой пробкой.
Ход определения кетоновых тел в сыворотке крови: на фильтровальную бумагу на кончике скальпеля помещают небольшое количество порошка (реактив Лестраде) и вносят пипеткой 1-3 капли сыворотки крови. При наличии в сыворотке крови свыше 10 мг% кетоновых тел через 40-60 секунд появляется окрашивание от розового до темно-фиолетового цвета.
Клиническое значение: кетоновые тела в небольших количествах имеются у здоровых животных. Повышенное содержание кетоновых тел связывают прежде всего с недостаточной обеспеченностью организма энергией (глюкозой), что бывает при белковом, жировом перекорме, ожирении, недостатке легкопереваримых углеводов в рационе, истощении и кахексии, нарушениях эндокринной регуляции метаболизма (сахарный диабет), при поражении желез внутренней секреции, гидрокортикоидизме, тиреотоксикозе.
В норме в сыворотке крови кетоновых тел мг/100 мл у животных составляет: у крупного рогатого окота - 1-6, у овец - 5-7, у свиней - 0,5-2,5.
Техника определения кетоновых тел в моче и молоке: на белую кафельную плитку или в чашку Петри на листке белой бумаги насыпают небольшое количество реактива Лестраде, который затем увлажняют 2-3-мя каплями исследуемой мочи или молока. При положительной реакции (наличии кетоновых тел) реактив окрашивается от розового до темно-фиолетового цвета. Окрашивание реактива может наступить через 2-3 минуты.
Клиническое значение: в моче и молоке здоровых животных имеется небольшое количество кетоновых тел, которые не улавливаются качественными реакциями. Повышение (свыше 10 мг%) содержания в моче кетоновых тел называется кетонурией, а в молоке - кетонолактией. Кетонурию, кетонолактию наблюдают при длительном голодании, истощениях различного происхождения, сахарном мочеизнурении, злокачественных новообразованиях, после длительного наркоза, кетозе молочных коров, кетонурии суягных овец, листериозе, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах.



Новости
15.10.2017 Инфекционный ларинготрахеит – вызывающая воспаление глаз и слизистой верхних дыхательных путей болезнь. Вызывает его относящийся к герпесовирусам вирус. Двенадцать часов он способен сохраняться при...

15.10.2017 Для покупки семя существует несколько вариантов мест. Это может быть рынок, специализированный или обычный магазин, супермаркет, виртуальные торговые площадки. Самостоятельно посевной материал...

15.10.2017 Вирусный гепатит утят – болезнь, проявляющая себя острым течением. Молодняк массово гибнет и испытывает угнетение. Возбудителем данной болезни является относящийся к пикорнавирусам вирус....

14.10.2017 Выбор саженцев роз и правильная их посадка – непременные условия получения красивого и пышного куста. Удобнее всего высаживать контейнерные розы, которые выращиваются в горшках. Прижимаются они лучше...

12.10.2017 При размещении инфракрасных обогревателей посредством подвеса к потолку, тепловой поток направлен вертикально вниз и в стороны. Поверхность пола и напольное покрытие являются непосредственной зоной...

12.10.2017 Все чаще и чаще на улицах и в парках можно встретить владельцев собак, выгуливающих своих питомцев в самых различных нарядах. Одежда для собак уже перестала кого-то удивлять и поражать, а...

© 2012 Все права защищены
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика