» » Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

31.03.2015

Методические указания. Химические анализы на определение тех или иных веществ в крови, молоке, сыворотке крови требуют лабораторных навыков по качественному и количественному анализу. Выполнение заданий студенты производят подгруппами по 2-4 чел. Ниже приведены наиболее простые и доступные методы их выполнения.
Место работы: кабинет-лаборатория кафедры.
Подопытные животные: корова.
Приборы и материалы:
- для выполнения первого задания: микробюретки, химические стаканчики, пипетки до одного миллилитра, сантинормальный раствор соляной кислоты, децинормальный раствор едкого натрия;
- для второго - пробирки, градуированная пипетка, фарфоровая чашка, спиртовка, спирт 96°, петролейный эфир, чистый бензин, дистиллированная вода;
- для третьего - ступка, фильтровальная бумага, реактивы нитропруссид натрия, безводный углекислый натрий, сульфат аммония.
Задания:
1. Определить щелочной резерв крови.
2. Определить количество каротина в сыворотке крови.
3. Исследовать молоко и мочу на наличие кетоновых тел.
Порядок выполнения заданий.
Определение щелочного резерва крови производится по следующей методике: к 10 мл сантинормального раствора соляной кислоты прибавляют 0,2 мл крови. Смесь взбалтывают и титруют из микробюретки децинормальным раствором едкого натрия до появления мути и выпадения хлопьев.
Вычтя из единицы количество израсходованной щелочи, опустив нуль и помножив разность на 20, получим показатель щелочности в миллиграмм-процентах (мг%) в 100 мл крови.
Пример. Израсходовано 0,69 мл щелочи. Вычисляем щелочность крови: 1 - 0,69 = 0,31. Исключаем нуль и 31 - 20 = 620 (мг%).
Коэффициент 20 получается из следующего расчета: 0,01 мл децинормального раствора едкого натрия содержит 0,04 мг NaOH; 0,2 мл крови составляет Vsoo часть от 100 мл крови; увеличиваем 0,04 в 500 раз и получаем число 20.
В норме щелочной резерв колеблется в пределах (в мг%): у крупного рогатого скота 460-540, у овец 460-520, у лошадей (рабочих) 540-580.
Определение каротина в сыворотке крови. В сухую пробирку наливают 0,2 мл свежей сыворотки, крови.
Прибавляют 4 мл 96° спирта и тщательно взбалтывают.
Приливают 2 мл петролейного эфира (или чистого бензина с температурой кипения 16°). Содержимое хорошо перемешивают и оставляют на несколько минут в покое.
Затем по каплям приливают из пипетки дистиллированную воду - 1,5-2 мл. При этом в пробирке происходит разделение эфирного и спиртового слоя. Каротин экстрагируется эфиром и окрашивает верхний слой в слегка желтовато-зеленый цвет.
Из верхнего эфирного слоя берут градуированной пипеткой 1 мл жидкости и по каплям испаряют ее на дне фарфоровой чашечки (предварительно слегка нагретой). Каплю необходимо опускать каждый раз на одно и то же место.
С появлением на дне чашечки едва заметного желтого кольца испарение прекращают и отмечают количество использованной жидкости. Появление кольца указывает на то, что в испарившемся количестве экстракта содержится 0,04 микрограмма, или 0,00004 мг каротина. Отсюда содержание каротина в 100 мл сыворотки в мг% вычисляют по формуле

Определение резервной щелочности и каротина в крови и обнаружение кетоновых тел в молоке (моче)

где X - содержание каротина в 100 мл сыворотки (мг%);
0,04 - содержание каротина в испарившемся количестве сыворотки в гаммах (микрограммах);
2 - количество миллиметров петролейного эфира;
К - количество миллилитров испарившегося эфирного экстракта до получения желтого кольца на дне чашечки;
0,2 - количество испытуемой сыворотки;
100 - приведение содержания каротина в 100 мл сыворотки; 1000 - перевод граммов в миллиграммы.
Для вычисления содержания каротина пользуются специальной шкалой П. Т. Лебедева.
Определение кетоновых тел в сыворотке крови, в моче и в молоке. Кетоновые тела (бета-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты, ацетон) образуются главным образом в печени и в меньшей степени в почках, а у жвачных в стенке преджелудков и молочной железе в результате окисления жирных кислот, а также в процессе обмена углеводов и некоторых аминокислот. При нормальном обмене веществ в организме ацетоуксусная кислота распадается на углекислый газ и воду (при включении в цикл три-карбоновых кислот), бета-оксимасляная кислота окисляясь превращается в высшие жирные кислоты, которые идут на синтез нейтральных жиров и других липидов.
Для выявления кетоновых тел проводят качественную реакцию, используя реактив Лестраде.
Обеспечение: испытуемая сыворотка, моча и молоко от животных, реактив Лестраде (натрия нитропруссида 1 г + натрия углекислого безводного 20 г + аммония сульфата 20 г).
Реактивы смешивают и растирают в ступке до получения мелкого однородного порошка, который затем хранят в тёмной посуде с плотно притёртой пробкой.
Ход определения кетоновых тел в сыворотке крови: на фильтровальную бумагу на кончике скальпеля помещают небольшое количество порошка (реактив Лестраде) и вносят пипеткой 1-3 капли сыворотки крови. При наличии в сыворотке крови свыше 10 мг% кетоновых тел через 40-60 секунд появляется окрашивание от розового до темно-фиолетового цвета.
Клиническое значение: кетоновые тела в небольших количествах имеются у здоровых животных. Повышенное содержание кетоновых тел связывают прежде всего с недостаточной обеспеченностью организма энергией (глюкозой), что бывает при белковом, жировом перекорме, ожирении, недостатке легкопереваримых углеводов в рационе, истощении и кахексии, нарушениях эндокринной регуляции метаболизма (сахарный диабет), при поражении желез внутренней секреции, гидрокортикоидизме, тиреотоксикозе.
В норме в сыворотке крови кетоновых тел мг/100 мл у животных составляет: у крупного рогатого окота - 1-6, у овец - 5-7, у свиней - 0,5-2,5.
Техника определения кетоновых тел в моче и молоке: на белую кафельную плитку или в чашку Петри на листке белой бумаги насыпают небольшое количество реактива Лестраде, который затем увлажняют 2-3-мя каплями исследуемой мочи или молока. При положительной реакции (наличии кетоновых тел) реактив окрашивается от розового до темно-фиолетового цвета. Окрашивание реактива может наступить через 2-3 минуты.
Клиническое значение: в моче и молоке здоровых животных имеется небольшое количество кетоновых тел, которые не улавливаются качественными реакциями. Повышение (свыше 10 мг%) содержания в моче кетоновых тел называется кетонурией, а в молоке - кетонолактией. Кетонурию, кетонолактию наблюдают при длительном голодании, истощениях различного происхождения, сахарном мочеизнурении, злокачественных новообразованиях, после длительного наркоза, кетозе молочных коров, кетонурии суягных овец, листериозе, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах.



Новости
15.10.2018 На сегодня важной сферой жизни является продажа овощей и фруктов, которые так пользуются популярностью среди населения нашей страны....

11.10.2018 Консерванты необходимы для увеличения срока хранения продуктов. Они предотвращают размножение и рост вызывающих порчу дрожжевых грибков, плесени, бактерий. Часть из таких добавок постоянно...

10.10.2018 Продажей запчастей занимается немало компаний. Сегодня часть из них работает в сети интернет. На их сайты наталкивались, скорее всего, все владельцы техники. Необходимые для автомобилей любого типа...

10.10.2018 Домашнее содержание хомяков – популярное увлечение. Дома можно держать хомяков Кэмпбелла, Роборовского, джунгариков, сирийских. От рациона и условий содержания зависит продолжительность жизни,...

08.10.2018 Марок и типов инкубаторов существует немало. Друг от друга они отличаются особенностями и степенью регулирования и управления, объемом, конструкцией и другими параметрами....

02.10.2018 Повысить урожайность меда стремятся все пасечники. Этот вопрос обычно возникает у них весной. Для достижения цели пчелам жизнь необходимо облегчить жизнь....

02.10.2018 Основная особенности породы хаски – это ездовые собаки, которые привыкли жить на улице. Не всегда комфортной является их жизнь в домашних условиях. Привязанность к человеку этой породе не...

29.09.2018 Строп – самое простое приспособление для захвата груза. Обычные стропы имеют вид цепи, троса или каната. Для перемещения и захвата груза предусматриваются петли или крюки с обеих сторон. Грузы...

29.09.2018 Ответственным делом является выбор саженцев плодовых деревьев для своего сада. Это многолетние растения, плодоношение которых начнется только спустя три-семь лет. Более тридцати лет плодоносят такие...

29.09.2018 Все большую популярность в качестве домашних животных набирают экзотические улитки ахартины. Это самые большие из всех моллюсков. Огромные улитки при этом являются неприхотливыми. От ближайших...

22.09.2018 Многие жители частного сектора мечтают о газификации дома. Однако даже в развитых регионах охват магистральными газопроводами не является полным. Более того, стоимость подключения может доходить до...

22.09.2018 Трескучие морозы и снега придут к нам очень скоро. Пора задуматься о том, какая зимняя одежда поможет пережить этот период в комфорте. Среди всех вариантов верхней одежды для этого сезона наиболее...

22.09.2018 Содержать пчел обычно принято в сельской местности. Вопросы размещения пасеки в этом случае решаются легко и быстро. Сложнее приходится горожанам, которые тоже хотят иметь пчел. Мало кто знает, но...

14.09.2018 В Китае в данный момент работает много производителей мебели. Некоторые мебельные фабрики являются известными по всему миру. Дизайнеры из Англии, Италии, Франции и других стран разрабатывают для них...

11.09.2018 Территорию оффшорных зон выбирают для своей деятельности многие успешные предприниматели. Объясняется это множеством факторов. Прежде всего, речь идет о многочисленных льготах в налогообложении,...

11.09.2018 Заводчикам домашней птицы нередко приходится сталкиваться с тем, что цыплята бройлеры перестают ходить. В определенный момент птица просто не встает. В таком случае говорят, что цыплята «упали на...

10.09.2018 7 сентября на территории особой экономической зоны в Калужской области прошла торжественная церемония закладки первого камня молокоперерабатывающего завода вьетнамской компании «TH true milk»....

10.09.2018 Главное в заботе о маленьком пушистом питомце – это составление правильного рациона питания. Неопытный владелец или профессиональный заводчик декоративных животных должен понимать, какой корм для...

06.09.2018 Крупы многие люди закупают впрок, чтобы в любой момент воспользоваться запасами для приготовления вкусных блюд. Увы, но не всегда просто в огромном ассортименте подобрать действительно вкусные и...

© 2012 Все права защищены
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика