» » Химическое исследование мочи и микроскопия содержащихся в ней осадков

Химическое исследование мочи и микроскопия содержащихся в ней осадков

31.03.2015

Методические указания. Исследование мочи от животных проводят с соблюдением правил личной гигиены и предосторожности при пользовании нагревательными приборами. При постановке реакций с кипячением нельзя направлять горлышко пробирки в сторону рядом сидящих товарищей, так как при быстром нагреве содержимое из нее может быть выброшено.
Нельзя пользоваться одной пипеткой для взятия реактивов, так как это повлечет за собой взаимное их перемешивание и порчу.
Занятия проходят более наглядно, если ставят одновременно две пробы: одну с мочой от здорового животного, другую - от больного.
Во время занятий студент должен выполнить три задания.
Приборы и материалы приготовляют из расчета один набор на 2—3 человек:
- для выполнения первого задания необходимы: урометры со шкалой от 1,000 до 1,025 и 1,025-1,060;
- для второго: моча от здорового животного; моча с белком (имитация) с пигментами крови, с глюкозой, с желчными пигментами; спиртовая горелка, урометр, лакмусовые бумажки, комплект пробирок, пробиркодержатели, цилиндры, воронка, фильтровальная бумага, сливная посуда, альбуминометры Эсбаха и Ауфрехта, центрифуга, реактив для постановки реакции по Ауфрехту (1,5 пикриновой кислоты, 3,0 лимонной кислоты и 100 мл дистиллированной воды), раствор уксусной кислоты, 50 %-ный раствор азотной кислоты, 20 %-ный раствор сульфосалициловой кислоты, реактив Эсбаха (состав: 1,0 пикриновой кислоты, 2,0 лимонной кислоты, 100,0 дистиллированной воды), 10 %-ный раствор едкого натрия или калия, раствор гвояковой смолы (0,25:50), озонированный скипидар, 3 %-ный раствор перикиси водорода, 10 %-ный раствор сернокислой меди, дрожжи прессованные, раствор Люголя, 1 %-ный водный раствор метиленовой синьки, фуксина или генцианвиолета, настойка йода, азотная кислота;
- для третьего: микроскопы, центрифуга с пробирками; таблицы (рисунки) - неорганизованные осадки мочи, организованные осадки мочи; предметные и покровные стекла; 1 %-ный раствор метиленовой синьки.
Задания:
1. Определить удельный вес и реакцию мочи.
2. Произвести химические исследования мочи на белок, пигменты крови, углеводы, кетоновые тела и желчные пигменты.
3. Исследовать осадки мочи.
Порядок выполнения заданий.
Определение удельного веса мочи. Для мочи с низким удельным весом пользуются урометром, имеющим шкалу от 1,000 до 1,025, а для концентрированной - 1,025-1,060.
Для определения удельного веса мочу наливают в цилиндр емкостью 100 мл. Если при этом образовалась пена, то ее удаляют фильтровальной бумагой.
Медленно погружают в мочу сухой урометр с таким расчетом, чтобы он не прикасался к стенкам цилиндра. О величине удельного веса судят по делению шкалы урометра, на котором остановился нижний конец мениска. Показания урометра рассчитаны на мочу с температурой 15 °С. В тех случаях, когда температура выше 15 °С, к показаниям урометра на каждые 3 °C необходимо прибавить по одной единице в четвертом знаке. При температуре ниже 15 °С, наоборот, из найденного числа нужно вычесть по одной единице на каждые 3 °С.
Если мочи мало для определения удельного веса, ее можно развести дистиллированной водой в 2-4 раза и произвести определение обычным способом. Помножив две последние цифры показателя урометра на степень разведения, получим удельный вес неразведенной мочи.
Определение реакции мочи производят с помощью лакмусовой бумажки.
Берут пинцетом полоску синей лакмусовой бумажки и опускают в исследуемую мочу. Если бумажка покраснеет, значит моча кислой реакции; сохранение синего цвета указывает на нейтральную или щелочную реакцию мочи.
Опускают в эту же мочу красную бумажку, если она посинеет, то моча щелочной реакции.
Реакция мочи амфотерная, если опущенные в мочу обе бумажки лишь слегка изменяют свой цвет.
Исследование мочи на белок. Для исследований на белок моча должна быть прозрачной и свободной от различных посторонних примесей.
Мочу лошади просветляют отстаиванием в течение 2-3 часов, затем верхний слой ее (20-30 мл) снимают при помощи пипетки и центрифугируют при 1000-1500 оборотах в течение 2-3 минут. После такой обработки моча становится пригодной для исследования.
Качественное определение белка.
Проба кипячением. В пробирку наливают 5-10 мл испытуемой мочи. Подкисляют мочу несколькими каплями 10 %-ного раствора азотной или уксусной кислоты до слабокислой реакции, взбалтывают и подогревают до кипения, Если моча щелочная, то возникает более или менее выраженное помутнение, при большом содержании белка выпадает рыхлый хлопьевидный осадок.
При отрицательной реакции к горячей моче добавляют равный объем насыщенного раствора поваренной соли. Быстрое помутнение всей жидкости говорит о присутствии белка.
В комбинации на высаливание, проба с кипячением является достаточно чувствительной и простой.
Проба с азотной кислотой (Геллера). Наливают в пробирку 3-5 мл 50 %-ного раствора азотной кислоты.
Осторожно по стенке пробирки наслаивают на нее такое же количество подкисленной профильтрованной мочи. При положительной реакции на месте соприкосновения жидкостей образуется мутно-белое кольцо.
Если альбуминурия незначительная, то кольцо возникает спустя 2-3 минуты после наслаивания.
При оценке результатов следует иметь в виду, что кроме сывороточного белка белое кольцо в пробе дают альбумозы, бальзамические вещества, выделяющиеся с мочой, и нуклеоальбумины. Присутствие мочекислых солей и красящих веществ в пробе дает на границе двух жидкостей цветное кольцо. Осадки из альбумоз исчезают при нагревании и появляются вновь при охлаждении испытуемой порции мочи, а нуклеоальбумин растворяется в избытке азотной кислоты.
Проба с сульфосалициловой кислотой (Роча). Наливают в пробирку 5 мл профильтрованной мочи.
Прибавляют к ней по каплям 20 %-ный раствор сульфосалициловой кислоты. При наличии белка каждая капля оставляет облачко мути, быстро оседающей на дно пробирки. Проба обладает большой чувствительностью и особенно удобна для исследования мочи лошади.
Количественное определение белка.
Наливают в альбуминометр до метки «М» фильтрованную кислую или подкисленную мочу.
Добавляют до метки «Р» реактив.
Альбуминометр закрывают резиновой пробкой и осторожно переворачивают 10-15 раз. При наличии белка моча мутнеет, а иногда в ней образуется рыхлый белый осадок.
После появления указанных признаков жидкость в альбуминометре отстаивают 18-24 часа и затем определяют количество белка по шкале на стенке альбуминометра. Каждое деление нижнего конца альбумин ометра соответствует разведению белка 1:1000 (т. е. количеству граммов белка на 1 л мочи). Если проба ставилась с разведенной мочой, то показания альбуминометра умножают на степень разведения.
Следует учитывать, что при лечении хинином, антипирином и бальзамическими веществами может выпадать осадок и при отсутствии в моче белка.
Метод Ауфрехта. Наливают в альбуминометр Ауфрехта 4 мл подкисленной неразведенной мочи.
Добавляют 3 мл реактива. Закрывают пробирку резиновой пробкой и медленно несколько раз переворачивают.
Устанавливают пробирку в центрифугу и центрифугируют 2-3 минуты.
По делениям альбуминометра определяют содержание белка в процентах.
Определение пигментов крови в моче. Для исследования берут нефильтрованную мочу.
Проба с едким натрием. Наливают в пробирку 6 мл мочи.
Добавляют 2 мл 10 %-ного раствора едкого натрия (калия).
Взбалтывают и кипятят. При кипячении выпадают фосфорнокислые соли кальция и магния, которые и увлекают в осадок кровяные пигменты. При положительной реакции на дне пробирки образуется красивый красный осадок.
Для мочи лошади проба с едким натрием мало чувствительна.
Бензидиновая проба (Адлер - Цитрона). В пробирку наливают 3 мл перекиси водорода.
Добавляют 10-15 капель (до молочной опалесценции) насыщенного раствора бензидина в уксусной кислоте.
В смесь капают испытуемую мочу. При положительной реакции появляется зеленое окрашивание.
Гваяковая проба. В узенькую пробирку вносят 20 капель свежеприготовленного спиртового раствора гваяковой смолы (0,25:50).
Добавляют такое же количество старого озонированного скипидара или 3 %-ной перекиси водорода и слегка взбалтывают.
Наслаивают эту смесь на исследуемую мочу. По линии соприкосновения жидкости моментально получается белое смолистое кольцо, которое в присутствии крови постепенно делается темно-синим.
Исследование мочи на углеводы. На сахар исследуют мочу прозрачную и свободную от белка, которого удаляют из мочи кипячением и затем фильтрованием. Для получения более точных результатов нужно ставить несколько проб.
Проба с сернокислой медью (Троммера). Наливают в пробирку 3 мл мочи.
Приливают 1 мл 10 %-ного раствора едкого натрия (калия) и взбалтывают.
По каплям прибавляют 10 %-ный раствор сернокислой меди до появления следов нерастворяющегося осадка гидрата окиси меди (растворение происходит до тех пор, пока в моче имеется свободный сахар).
Лазурево-синюю жидкость осторожно подогревают на пламени горелки, не доводя до кипения. При положительной реакции цвет жидкости изменяется в желто-красный (от закиси меди и гидрата закиси меди).
Определение молочного сахара. В пробирку наливают 5 мл мочи. Прибавляют одну каплю аммиака и 3 капли раствора свинцового сахара.
Взбалтывают и помещают в водяную баню. Если в моче имеется лактоза, то на дне пробирки остается белый осадок, а при наличии глюкозы он приобретает желтовато-красный цвет.
Определение количества глюкозы по Робертсу. 300 мл испытуемой мочи разделяют на две равные части и к одной из них добавляют растертые дрожжи. Через 24 часа в обеих порциях мочи определяют удельный вес и разницу умножают на 0,23. Результат перечисления дает процент глюкозы в данной моче.
Исследование мочи на кетоновые тела.
Проба на кетоновые тела. В пробирку наливают 5 мл профильтрованной мочи и подщелачивают 10 %-ным раствором едкого натрия до явно щелочной реакции. Прибавляют 4-6 капель люголевского раствора или настойки йода и слабо нагревают. В присутствии ацетона образуется йодоформ, выпадающий в виде желтого кристаллического осадка, издающего запах йодоформа.
Проба с нитро-пруссиднатрием (Легаль). В пробирку наливают 5 мл профильтрованной мочи.
Прибавляют 3-5 капель 10 %-ного раствора едкого натрия (калия) и взбалтывают.
Добавляют 5 капель свежего насыщенного раствора нитро-пруссиднатрия. При положительной реакции жидкость окрашивается в рубино-красный цвет, который после прибавления нескольких капель ледяной уксусной кислоты переходит в пурпурно-красное или фиолетовое окрашивание. При отрицательной реакции моча окрашивается в желтый цвет.
Исследование мочи на желчные пигменты.
Проба на фильтровальной бумаге (по Розенбергу). Испытуемую мочу фильтруют и на поверхность фильтра наносят 1-2 капли азотной кислоты. В присутствии желчных пигментов вокруг капли кислоты образуется ряд цветных колец. Наружное зеленое кольцо является характерным для желчных пигментов.
Исследование осадков мочи.
Для получения микроскопических препаратов с мочевыми осадками пользуются свежевыделенной мочой, так как с течением времени может измениться ее реакция, а следовательно, и характер осадка солей и форменных элементов. Различают осадки щелочной и кислой реакции мочи. Поэтому до микроскопического исследования определяют ее реакцию. Получают осадки фильтрованием, отстаиванием и центрифугированием.
При сильном разведении мочи крупного рогатого скота, свиней и собак получать осадки лучше фильтрованием. Для этого пропускают через смоченный бумажный фильтр определенное количество мочи, затем, вынув из воронки, шпателем или петлей собирают с его поверхности осадок. Моча лошади фильтруется медленно.
Отстаивание мочи удобно производить в конических сосудах. Отстаивают мочу лошади около суток, крупного рогатого скота и свиней 2-3 часа. После того как осадок сформируется, осторожно сливают жидкость. Можно, не сливая жидкости, взять осадок. Для этого берут пипетку, закрывают пальцем верхний ее конец и опускают до дна сосуда. Затем отнимают палец. Как только осадок наберется в пипетку, закрывают ее снова пальцем и вынимают. Капельку осадка переносят на предметное стекло и покрывают тонким покровным стеклом. При этом надо следить, чтобы покровное стекло плотно лежало на осадке, не смещалось и не плавало на поверхности капли.
Для ускорения получения осадка пользуются центрифугированием.
Окрашивают препараты люголевским раствором, 1 %-ным водным раствором метиленовой синьки или фуксина, генцианвиолета и др. Капельку краски при помощи тонкой пипетки вносят под покровное стекло препарата и сейчас же исследуют под микроскопом.



Новости
19.04.2018 В быту современная «химия» помогает, безусловно, очень сильно. В ванной комнате налет на плитке помогает быстро удалить спрей, покрытые слоем жира плиты отмывают специальные гели, грязь, которая...

19.04.2018 В занимающих большую территорию хозяйствах для проведения ветеринарно-санитарных работ используют установку дезинфекционную ДУК-1. Благодаря ей проводят мытье или опрыскивание подогретыми растворами...

16.04.2018 Мечтой многих проживающих в частном секторе людей является газификация дома. Однако даже в развитых регионах охватывают магистральные газопроводы не все районы. Более того, стоимость подключения к...

10.04.2018 Металлопрокат – продукция, которую получают с применением специального оборудования путем длительной переработки из железной руды. Процесс изготовления таких изделий является весьма трудоемким....

10.04.2018 На три подгруппы условно делят все мероприятия, направленные на ликвидацию инфекционных болезней животных. Очаг инфекции сначала обследуется, потом купируется, а после ликвидируется. Во время...

09.04.2018 Название блюда звучит страшновато, тем не менее, оно вкусное и готовить его довольно просто. Баранину тушим с овощами и при этом используем не простую, а «специальную» воду. Этот процесс улучшит...

© 2012 Все права защищены
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика