» » Методы радиоизотопных исследований (часть 2)

Методы радиоизотопных исследований (часть 2)

11.09.2012

Основой рассматриваемого анализа является конкурентная реакция меченого и немеченого антигенов за связь со специфическим антителом. Реакция между антигеном и антителом рассматривается как обратимая, продуктом которой является комплекс «антиген — антитело». Для определения неизвестной конкуренции антигена его смешивают с известным и постоянным количеством меченого антигена. Затем к смеси добавляют антитела и инкубируют до установления динамического равновесия, приводящего к образованию комплексов «немеченый антиген — антитело» и «меченый антиген — антитело». Поскольку в условиях проведения анализа всегда подбирается сумма немеченого и меченого антигенов больше числа мест связывания (наличия антител), то будет связана только часть немеченого и меченого антигенов. Следовательно, только часть меченого антитела участвует в образовании комплекса, и она будет пропорционально уменьшаться при увеличении немеченого антигена. После инкубации комплексы «немеченый антиген — антитело» отделяют от свободных немеченого и меченого антигенов, определяют радиоактивность в одной или обеих фракциях и по стандартной кривой вычисляют количество антигена в исследуемой пробе.
Стандартную кривую строят одновременно с определением неизвестной концентрации антигена.
Как уже отмечалось выше, принцип радиоиммунологического анализа не ограничивается иммунными системами, Его можно применять и для других систем, в которых вместо специфического антитела будет действовать специфический реагент или связывающее вещество (специфические плазменные белки, например, тиреоглобулин, кортикотропин, инсулинсвязывающий белок и др.; энзим, или рецепторный участок ткани).
При проведении радиоиммунологического анализа гормонов и других биологически важных соединений используют готовые стандартные коммерческие наборы реагентов (kit), выпускаемые многими зарубежными фирмами и отечественной промышленностью. В состав Набора входят все необходимые реактивы: меченый антиген, антисыворотки или белок, связывающий этот антиген, активный copбент для разделения свободной и связанной фракции, буфер для приготовления раствора. Все реагенты поставляются в лиофилизированном виде либо в виде растворов со стабилизаторами, В среднем один набор рассчитан на 100—200 определений. Применение этих наборов значительно упрощает технику анализа (не надо получать антисыворотку к определенному антигену, метить радиоактивной меткой аналогичный очищенный антиген, проводить очистку и т. д.), повышает точность и воспроизводимость результатов, делает радиоиммунологическое определение доступным научным и практическим лабораториям, обеспечивает широкое распространение метода.
В плане затрат времени и возможностей автоматизации радиоиммунологический анализ превосходит другие лабораторные методы, и на сегодняшний день трудно назвать метод, который находил бы такое широкое применение.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Информационный некоммерческий ресурс handcent.ru © 2022
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика