» » Экспресс-метод постановки РБТЛ (часть 1)

Экспресс-метод постановки РБТЛ (часть 1)

08.02.2013

От каждого животного в асептических условиях из яремной вены в стерильную пробирку берут по 30—60 мл крови. В качестве антикоагулянта используют гепарин. Образцы крови выдерживают 1 ч в холодильнике при +4°С, после чего отстоявшийся слой плазмы, содержащий лейкоциты с небольшой примесью эритроцитов, отсасывают в новую пробирку. В камере Горяева подсчитывают количество лейкоцитов в выделенных порциях плазмы, которые разбавляют средой 199, содержащей антибиотики (пенициллин-натриевая соль — 50ед/мл, стрептомицин-хлор-кальциевый комплекс — 50 ед/мл), с таким расчетом, чтобы конечная концентрация лейкоцитов составила 1*10в6—1,5*10в6 в 1 мл взвеси. Для нормализации среды добавляют L-глютамин (0,1 мл 1%-ного раствора на 10 мл). Приготовленную лейкоцитарную взвесь по 2 мл разливают в стерильные флаконы из-под пенициллина.
По окончании культивирования клетки отслаивают со дна флаконов интенсивным встряхиванием либо добавлением 2 мл 0,02%-ного раствора версена, подогретого до 37,5° С. Взвесь лимфоидных клеток центрифугируют при 600 об/мин в течение 10 мин. Цитологические препараты приготовляют разбрызгиванием капли взвеси на предварительно обезжиренное предметное стекло. Препараты подсушивают в струе теплого воздуха над пламенем спиртовой горелки, затем 10 мин фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза.
Морфологическая оценка РБТЛ. Для определения показателя РБТЛ в препаратах при иммерсионном увеличении микроскопа подсчитывают: интактные лимфоциты, переходные клетки, бласты и митозы. Морфология лимфоцитов в культуре ткани та же, что и в циркулирующей крови. Переходные клетки содержат формы, которые в силу увеличенных размеров (диаметр 10—20 мкм) не являются лимфоцитами и отличаются от последних нарастанием базофилии цитоплазмы, В ядрах этих клеток обнаруживают единичные ядрышки.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Информационный некоммерческий ресурс handcent.ru © 2022
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна

Яндекс.Метрика